寡核苷酸药物，作为一类新兴的生物分子治疗剂，通过精准靶向mRNA，展现出了在基因表达调控上的显著潜力。然而，这类药物的复杂性也给临床前生物分析带来了一系列挑战，包括对检测灵敏度、特异性和稳定性的要求。其中，LC-MS/MS技术因其在定量分析和代谢物鉴定方面的卓越表现而备受青睐。随着科技的不断进步，多种创新的分析技术应运而生，为寡核苷酸药物的研究和开发提供了更为丰富的选择。

28圈云讲堂邀请药物代谢动力学部DMPK副主任万咪咪，结合丰富实践经验和项目经验，为您破解在寡核苷酸类药物生物分析中的挑战。

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1 HILIC方法的改进是否使其成为寡核苷酸生物分析的一种选择？使用离子配对剂仍然是首选的方法吗?

万咪咪：与离子对反相液相色谱（IP RP HPLC）相比，HILIC方法在分离选择性和灵敏度方面表现弱一些；
目前已经有许多尝试替代离子对系统的HILIC方法，但很少看到相当的分析性能

HILIC方法在寡核苷酸生物分析中具有一定的应用潜力，尤其在需要使用不含离子对试剂的情况下。然而，离子对反相液相色谱仍然是首选的方法，因为它在分离效率和灵敏度方面表现更好。

2 本期云讲堂中，您介绍了pH值对寡核苷酸药物吸附损失的影响，那么在生物分析中，为何要使用高pH的流动相？这种高pH的流动相的分析有哪些优势和局限性？

万咪咪：在生物分析中，使用高pH值的流动相具有多个优势。首先，高pH环境能够显著提高寡核苷酸的稳定性。DNA和RNA在中性至碱性条件下更为稳定，因此高pH条件下有助于；す押塑账岬耐暾院臀榷ㄐ。

从LC-MS分析的角度来看，高pH条件下寡核苷酸保留能力增加，这有助于提升分离效果和分辨率。此外，高pH流动相还能减少非特异性吸附，从而提高方法的回收率、准确性和重现性。
然而，高pH值的流动相也存在一些局限性。特别是对柱材料的稳定性做成一定影响，尤其是硅胶柱材料，这将会影响色谱柱的使用寿命和维护成本。

3 寡聚核苷酸类药物生物分析平台的选择有哪些？

万咪咪： 随着寡核苷酸结构多样性的增加以及样品制备和分析技术的进步，其生物分析也在不断的发展。对于寡核苷酸生物分析的选择仍然是基于适合目的原则，并应根据具体情况进行评价。例如，在进行微量样本分析时，如果LC-MS不能够满足分析需求，研究人员可能会考虑采用HELISA或qPCR作为分析方法。然而，如果已知HELISA或qPCR会受到某些因素的影响，那么在条件允许的情况下，LC-MS由于其更高的准确性，可能会成为首选。

4 请问食蟹猴鞘内注射给药，是进行腰椎插管给药吗？脑脊液的采集是如何采集，在什么位置采集？有多少小核酸鞘内注射的研究经验？

万咪咪：食蟹猴鞘内注射给药注射位点在L3/L4或L4/L5位置进行腰椎间穿刺，通过枕大池连续脑脊液收集。28圈科研团队具有丰富的项目经验，可以做猴子，大鼠鞘内注射，并且能够提供定制化的解决方案，满足客户需求。

如果您对于新药研发临床前研究过程中有一些困惑或者想要深入了解的专题内容，可以留下您的问题和建议，28圈希望和您一起，探索新药研发的奇妙世界。